Lampropoulos A, Sutikovic Z, Wenzl C, Maegele I, Lohmann JU, Forner J (2013) GreenGate - A Novel, Versatile, and Efficient Cloning System for Plant Transgenesis. PLoS ONE 8(12): e83043. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0083043
Die Golden Gate-Klonmethode ist ein einfaches und unkompliziertes Verfahren. Im oben genannten Paper haben Lampropoulos et al. beschreiben eine veränderte Form davon, die für die Pflanzentransgenese entwickelt wurde, und nennen sie geschickt GreenGate. Das gesamte Verfahren ist durch Typ IIS Restriktionsenzymen möglich. Diese Enzyme schneiden nach der Erkennungsstelle an einer definierten Anzahl von Nukleotiden. Unser FastGene BsaI ist ein solches Enzym.
Die für dieses System erstellten Pflanzentransformationsvektoren umfassen:
- Promoter
- N-terminaler Tag
- Codierungssequenz (CDS) (d. H. Das interessierende Gen)
- C-terminaler Tag
- Pflanzenterminator
- Pflanzenresistenzkassette
Der Hauptvorteil der Verwendung von GreenGate ist eine dramatische Verkürzung der Plasmidproduktionszeit beim Bau einer transgenen Pflanze mit mehreren Konstrukten.
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https://doi.org/10.1371/journal.pone.0083043
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FastGene Bsa I
